新方法允许快速，绝对定量的病毒核酸

　　新加坡-麻省理工学院研究与技术联盟(SMART)的跨学科研究小组(IRG)的研究人员开发了一种快速准确检测病毒核酸的新方法，这是一项突破，可以很容易地用于检测冠状病毒等病毒中的不同DNA/RNA靶标。

　　这次大流行突出了快速诊断和改进病毒检测方法的重要性，特别是在世界寻求为未来的大流行或下一个危险病原体做好准备之际。特别是，生物制造行业面临着使用细胞作为细胞治疗产品的独特挑战，正在寻找快速检测病毒污染方法的创新，作为其质量控制过程和释放测试的一部分。虽然逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)被认为是病毒检测的金标准，但它们存在局限性，并且通常会产生不同的结果。

　　一个更精确的版本是数字PCR方法，它允许绝对定量——这意味着它揭示了样本中病毒的拷贝数——可以允许设置病毒污染的明确阈值，并且不容易受到标准qPCR方法所要求的内参基因的潜在波动的影响。然而，数字PCR需要相对较长的反应时间，大约需要4个小时。目前所有基于pcr的方法的另一个缺点是它们需要昂贵的设备来进行精确的温度控制和循环。

　　CAMP开发的新方法-快速数字Crispr方法(RADICA) -允许在水浴(一种原型和廉价的实验室设备)中以等温方式在40-60分钟内对病毒核酸进行绝对定量。研究组的研究成果发表在最近出版的权威杂志《生物材料》上，题为《基于数字crispr的核酸快速检测和绝对定量方法》。

　　RADICA方法已在培养的B细胞和患者血清中对SARS-CoV-2合成DNA/RNA以及爱泼斯坦-巴尔病毒进行了测试。研究人员说，这种方法可以用于检测其他类型的病毒，以及其他类型的样本，如唾液和细胞培养基。RADICA还能够将该病毒与其近亲区分开来。

　　该团队利用样品中提取的DNA/RNA，将15 μL的反应分成数千个独立的分区。在每个分区中，DNA/RNA被扩增并被Cas12a蛋白识别，Cas12a蛋白是一种可以将目标信号转化为荧光信号的酶。这允许通过计算具有目标DNA/RNA并被点亮的分区的数量来实现绝对定量。

　　“去年向我们展示了快速准确地检测病毒的重要性，而RADICA可以帮助填补这一领域的现有空白，”新加坡国立大学教授、SMART CAMP的共同通讯作者和联合首席研究员亨利·余(Hanry Yu)说。“细胞治疗产品的保质期非常短，患者通常迫切需要治疗。目前的不育测试需要大约14天，对于临床需求来说太慢了，但RADICA将这一过程缩短到了几个小时。”

　　联合通讯作者、CAMP首席研究员、麻省理工学院生物工程、电子工程和计算机科学副教授蒂姆·卢(Tim Lu)教授表示，该团队的方法比目前使用的方法更快、更便宜、更有效，其数字格式使其更能耐受可能存在于生物样品中的污染或抑制剂——通常是细胞治疗产品。卢教授补充说，除了检测目标病毒的存在之外，RADICA还可以识别样本中有多少病毒，这可以帮助医生和研究人员决定治疗过程，以及细胞治疗产品的生产和库存管理。

　　虽然CAMP的研究人员开发了RADICA用于监测细胞治疗制造过程和细胞治疗产品的生物安全释放测试，但吴博士说，该方法也可用于检测不同病毒的DNA/RNA靶点，并适用于医院和服务实验室中常见的设备——这为应对流行病提供了一种潜在的新方法。